В микробиологических лабораториях уже широко используют автоматические и полуавтоматические анализаторы, с помощью которых идентифицируют бактерии и определяют минимальную ингибирующую концентрацию антимикробных препаратов для конкретного возбудителя. Однако следует отметить, что при этом на идентификацию микроба требуется не менее 18-24 часов («быстрые» панели позволяют провести идентификацию в течение 4-6 часов). Кроме того, после получения первичных колоний или бактериальной массы на жидкой питательной среде необходимо получить чистую культуру для использования в автоматическом анализаторе.
Одним из последних достижений мировой науки является внедрение в медицинскую лабораторную практику метода масс-спектрометрии. Масс-спектрометрия обеспечивает высокую производительность и практически 100% специфичность и чувствительность, а также непревзойденную скорость анализа. Эта технология, несомненно, открывает новую эру диагностики.
Что же такое MALDI-TOF масс-спектрометрия? Ниже даны описания ключевых терминов.
Масс-спектрометрия - метод идентификации молекул путем измерения отношения их массы к заряду (m/z) в ионизированном состоянии.
Компания Биомерье представляет новую систему идентификации микроорганизмов на платформе MALDI TOF MS. Прибор получил название Vitek MS.
Для идентификации бактерий Vitek MS (MALDI-TOF) определяет спектр белков напрямую из бактериальной клетки без предварительной длительной пробоподготовки. Для каждого вида микроорганизмов сформирован характерный набор белков (биомаркеров), полученный на основе анализа не менее 50 масс-спектров этого вида. При этом образцы получены из различных источников (больниц, лабораторий, микробиологических коллекций), а каждый образец тщательно идентифицирован с помощью сиквенса 16s РНК или других сертифицированных методов анализа. Структурированная таким образом база данных позволяет быстро и точно идентифицировать микробиологические штаммы.
Вся методика идентификации на Vitek MS (MALDI-TOF) состоит из 2-х этапов:
Этап 1: Подготовка образца
Анализ начинается с того, что на подложке масс-спектрометра смешивают биоматериал из колонии бактерий и специальную матрицу (2',5' дигидроксибензойная кислота), раствор уже готов к использованию и устойчив к свету). Затраты по времени для подготовки 24 изолятов - 10 минут, для 96 изолятов - 33 минуты.
Этап 2: Идентификация
После этого образец помещают в прибор и подвергают воздействию наносекундных лазерных импульсов. При этом молекулы матрицы и аналита (в частности, белки) переходят в газовую фазу, а протонированные молекулы матрицы взаимодействуют с белками, перенося на них положительный заряд. Под действием электрического поля ионизированные белки движутся от источника ионизации к детектору с ускорениями, обратно пропорциональными их атомным массам. Программное обеспечение прибора оценивает время пролета частиц и преобразует эту информацию в спектр молекулярных масс (масс-спектр). Масс-спектр сравнивается со спектрами из базы данных, и на основании сведений о массах характеристических белков происходит идентификация микроорганизмов. Затраты по времени для идентификации 24 изолятов - 12 минут, для 96 изолятов - 43 минуты.
Таким образом, на идентификацию одного микроорганизма требуется меньше 2-х минут времени, при этом образцом может служить первичная колония! База данных Vitek MS состоит из 755 клинически значимых видов (бактерий, дрожжей, плесневых грибов/ дерматофитов, микобактерий) и покрывает большинство видов, встречающихся в ежедневной практике микробиологической лаборатории, и эта база постоянно пополняется.
ОБЛАСТИ ПРИМЕНЕНИЯ:
Однако метод масс-спектрометрии не может быть использован для определения чувствительности бактерий к антимикробным агентам. Для решения задачи комплексного подхода идентификации и определения антибиотикочувствительности компания Биомерье совместила два анализатора Vitek MS (проведение идентификации образца) и Vitek 2 (определение чувствительности к АМП и МИК). Эта связь осуществляется через станцию подготовки образцов Vitek MS PREP (входит в комплектацию Vitek MS), которая надежно связывает информацию об образце с ячейками слайда Vitek MS и с позицией кассеты в Vitek 2, и программное обеспечение MYLA (входит в комплектацию Vitek MS), которую разработали специалисты Биомерье в помощь микробиологам для обеспечения полной автоматизации процессов в лаборатории.
Программное обеспечение Myla представляет собой компьютерное приложение (межплатформенное ПО), основанное на технологии Web 2.0, которое отслеживает все действия, выполняемые на микробиологическом лабораторном столе, обеспечивает взаимодействие между приборами, подключенными к приложению, и ЛИС (лабораторной информационной системой).Функциональные возможности Myla позволяют оптимизировать работу в микробиологической лаборатории и улучшают передачу информации в реальном времени.
Главные преимущества анализатора Vitek MS:
Нет сомненний, что Vitek MS + Vitek 2 + ПО MYLA = лучшее решение для идентификации и определения чувствительности.